小鼠胚胎細(xì)胞步驟如下：
1）棄去培養(yǎng)液，用PBS洗1-2次。
2）向瓶內(nèi)加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有6ml 含10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。
3）加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)
4）傳代比例：1:2-1:3
小鼠胚胎細(xì)胞常見問題及解決方案
1）培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。
2）細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。
傳代方法：收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)：如果沒長滿，將培養(yǎng)瓶用75%酒精xd后在超凈臺內(nèi)更換新鮮培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，如果細(xì)胞已經(jīng)長滿（約80%-90%）則傳代后繼續(xù)培養(yǎng)。
小鼠胚胎細(xì)胞技術(shù)相關(guān)問答：
1. 如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？
培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，{sx}MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個好的開始。
2. 何時須更換培養(yǎng)基？
視細(xì)胞生長密度而定， 或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間，按時更換培養(yǎng)基即可。
3. 可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基， 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基， 細(xì)胞大都無法立即適應(yīng)， 造成細(xì)胞無法存活。
4.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？
不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清， 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細(xì)胞無法存活。
上海篤瑪生物相關(guān)促銷產(chǎn)品信息
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小鼠胚胎細(xì)胞
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DMEM+10% Calf serum
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貼壁
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成纖維細(xì)胞
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大鼠肺泡巨噬細(xì)胞
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F-12K+20% FBS
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貼壁和懸浮混合
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巨噬細(xì)胞
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正常大鼠腎細(xì)胞
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DMEM+10% FBS
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貼壁
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上皮細(xì)胞樣
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大鼠腎小管導(dǎo)管上皮細(xì)胞
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DMEM+5% FBS
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貼壁
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上皮細(xì)胞樣
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負(fù)鼠腎小管細(xì)胞
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MEM+10% FBS
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貼壁
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上皮細(xì)胞樣
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小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞
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MEMα-+20% FBS
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貼壁
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成纖維細(xì)胞樣
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人腎癌細(xì)胞
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RPMI-1640+10% FBS
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貼壁
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上皮細(xì)胞樣
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人卵巢癌細(xì)胞
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DMEM+10% FBS
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貼壁
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上皮細(xì)胞樣
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小鼠畸胎瘤細(xì)胞
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MEMα-+7.5% BCS+2.5% FBS
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貼壁
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上皮細(xì)胞樣
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小鼠淋巴樣瘤細(xì)胞
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RPMI-1640+10% horse serum
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懸浮
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淋巴母細(xì)胞
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小鼠骨髓瘤細(xì)胞
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DMEM+10% FBS
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懸浮
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淋巴母細(xì)胞
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小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞
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DMEM+10% FBS
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半懸浮
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肥大細(xì)胞
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小鼠成纖維細(xì)胞
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DMEM+10% FBS
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貼壁
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成纖維細(xì)胞
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人胰腺癌細(xì)胞
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DMEM+10% FBS
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貼壁
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上皮細(xì)胞樣
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人前列腺癌細(xì)胞
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F-12 +10% FBS
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貼壁
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上皮細(xì)胞樣
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豬髖動脈內(nèi)皮細(xì)胞
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RPMI-1640+10% FBS
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貼壁
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上皮細(xì)胞樣
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豬腎細(xì)胞
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DMEM+10% FBS
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貼壁
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上皮細(xì)胞樣
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人肝癌細(xì)胞
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RPMI-1640+10% FBS
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貼壁
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上皮細(xì)胞樣
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人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞
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RPMI-1640+10% FBS
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懸浮
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淋巴母細(xì)胞
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小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞
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DMEM + 10% FBS
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貼壁
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不規(guī)則圓形
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人肝膽管癌細(xì)胞
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RPMI-1640 + 10% FBS
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貼壁
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上皮細(xì)胞樣
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大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞
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MEM+15% FBS(滅活)
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貼壁
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成纖維細(xì)胞
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人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞
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DMEM+10% FBS
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貼壁
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紡錘形,多核
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猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞
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RPMI-1640 + 10% FBS
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貼壁
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上皮細(xì)胞樣
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大鼠肝癌細(xì)胞
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DMEM+10% FBS
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貼壁
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上皮細(xì)胞樣
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人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
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MEM+10% FBS
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貼壁
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上皮細(xì)胞樣
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人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞
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DMEM:F12+0.005mg/mL INS+10% FBS
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貼壁
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上皮細(xì)胞樣
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